Inhoud
Hoogwaardige vloeistofchromatografie (HPLC) is een gebruikelijke methode voor laboratoriumanalyse waarbij een monster wordt gescheiden in zijn chemische componenten terwijl het door een kolom passeert. Deze kolom is gevuld met een poreus materiaal, typisch silicagel. Een standaard kolom met omgekeerde fase, zoals C8, kan soms verstopt raken of besmet raken. Deze kolommen kunnen worden opgehaald met behulp van zeer eenvoudige technieken.
routebeschrijving
-
Schakel de kolom uit en draai de positie om zodat de mobiele fase nu binnenkomt via wat normaal de uitvoer van de kolom is. Bevestig een uitgang aan het andere uiteinde van de kolom (die de oorspronkelijke ingang was) en laat deze in een ontlading lopen.
-
Pomp een reeks oplosmiddelen in volgorde van afnemende polariteit. Een aanbevolen basisserie is om te beginnen met methanol, vervolgens over te schakelen naar acetonitril, vervolgens acetonitril / isopropanol (75:25), isopropanol, methyleenchloride en hexaan. Als de mobiele fase die zich in de kolom bevond absorberend was, wordt een passage met water eerder in methanol aanbevolen. Een stroomsnelheid van één tot twee milliliter per minuut is voldoende en ongeveer tien volumekolommen van elk oplosmiddel moeten worden gepompt. De volumekolom is de binnenruimte van de kolom en wordt berekend door (0,7 x pi x (DI / 2) ^ 2 x L), waarbij DI de binnendiameter van de kolom is en L de lengte is.
-
Pomp nog eens tien volumes isopropanol door de kolom om het voor te bereiden voor gebruik met de originele mobiele fase. Als de oorspronkelijke mobiele fase is opgevangen, pomp dan ook water door de kolom na de isopropanol, voordat u terugkeert naar de oorspronkelijke mobiele fase.
-
Schakel de kolom uit, draai hem om en grijp hem opnieuw vast, zodat deze zich in de oorspronkelijke positie bevindt (zodat de beweegbare fase de rechterkant van de kolom binnengaat). Sluit de luidsprekeruitgang opnieuw aan op de detector.
De kolom herstellen
tips
- Als dit proces de kolom niet grondig reinigt, kan een 50:50 mengsel van dimethylsulfoxide (DMSO) en dimethylformamide (DMF) worden gebruikt. Residuen van eiwitten en metaalionen kunnen andere typen oplosmiddelen vereisen, zoals ionensparende reagentia of een oplossing van ethyleendiamine tetra-azijnzuur (EDTA).
waarschuwing
- Bij sommige apparaten heeft de wervelkolom een ruwe metalen zeef als inlaat. In dit geval kan door het terugzetten van de kolom de stationaire fase de kolom verlaten en dit wordt niet aanbevolen. Raadpleeg uw dealer als u het niet zeker weet.
- Het bij dit proces gebruikte oplosmiddel is mogelijk giftig bij inslikken en inhalatie. Gebruik bij het hanteren normale laboratoriumvoorzorgsmaatregelen.
Wat je nodig hebt
- HPLC-apparaat
- water
- methanol
- acetonitril
- isopropanol
- Methyleenchloride
- hexaan
