Inhoud
Hogedrukvloeistofchromatografie (HPLC) is een hulpmiddel dat wordt gebruikt om stoffen uit een mengsel te scheiden. De scheiding en identificatie van bepaalde chemicaliën gebeurt voornamelijk in de chromatografische kolom van het systeem. Er zijn veel kolomtypen beschikbaar voor CLAE, en elk wordt gebruikt voor een specifiek type analyse. De C18-kolom is de sterkste niet-polaire die over het algemeen wordt gebruikt. Na langdurig continu gebruik neemt de stroomsnelheid van het oplosmiddel erdoor af en neemt de analysetijd toe. Een andere oorzaak van de afname van de analysetijd is dat er monsters zijn die kleine hoeveelheden chemicaliën in het kolommateriaal achterlaten, waardoor ze minder goed gescheiden kunnen worden. Het herstel van het oppervlak kan worden gedaan door het materiaal te behandelen met een reeks specifieke oplosmiddelen om het te reinigen van eventuele overgebleven monsters en het ondersteunende materiaal nieuw leven in te blazen.
Stap 1
Verwijder kolom C18 uit de stroomrichting en plaats deze in tegengestelde richting. Door het oplosmiddel er weer doorheen te krijgen, wordt het accumulatie-effect dat na verloop van tijd optreedt, verminderd. Er moet voor worden gezorgd dat er niet te veel materiaal achterblijft aan het einde van de kolom. Sommige fabrieken gebruiken een groter gaas aan de bovenkant, zodat wanneer de stroom van richting verandert, het gaas zich in de positie eronder bevindt. Deze methode van herstel wordt stroomomkering genoemd. Om te voorkomen dat opeenhoping naar de systeemdetector stroomt en mogelijk een obstructie veroorzaakt, moet u deze laten functioneren zonder dat de detector is aangesloten en de stroom van de kolom naar de afvoer leiden.
Stap 2
Plaats de doorlaatbuis voor het oplosmiddel in een reeks oplosmiddelen om eventuele in de kolom vastgehouden verbinding in de tegenovergestelde richting te elueren. Deze oplosmiddelen variëren in hun hydrofiele eigenschappen. Door ze te variëren, elueert u verbindingen met een even diverse hydrofiele aard. Gebruik achtereenvolgens 50 ml van elk van de volgende oplosmiddelen: water (als u een buffer gebruikt), methanol, isopropanol, dichloormethaan, hexaan, dichloormethaan en isopropanol.
Stap 3
Vervang de kolom in de juiste richting en laat uw oplosmiddel er doorheen stromen. Gebruik minimaal 75 ml om het te wassen voordat u verder gaat. Test het met een patroon dat u gebruikte toen het nieuw was en controleer de resultaten. Let op bij het bereiken van de maximale retentiepunten en de totale analysetijd. De mate waarin deze attributen overeenkomen met de initiële test toen deze nog nieuw was, geeft aan in welke mate de kolom is hersteld. Als de resultaten niet bevredigend zijn, vervangt u de kolom door een nieuwe en gooit u de oude weg.
