Inhoud

• routebeschrijving

Bij het volgen van microbiologie op een hoger niveau, kan je docent je vragen om een ​​project te voltooien waarin je een onbekende bacterie moet identificeren aan de hand van een reeks tests. Om deze bacterie goed te kunnen identificeren, is het noodzakelijk om over alle juiste laboratoriumapparatuur te beschikken en om verschillende laboratoriumprocedures te kennen. Het is ook voordelig om een ​​stroomdiagram van de bacteriën en hun laboratoriumtests te hebben, zodat u uw bacteriën kunt identificeren.

routebeschrijving

Cultuurplaten maken het mogelijk bacteriën te isoleren om gemakkelijk hun kenmerken te identificeren (Hemera Technologies / Photos.com / Getty Images)

1. Bereid alle tests voor het begin van het experiment. Dit omvat het voorbereiden van de agarplaten en -buizen en het voorbereiden van de noodzakelijke indicatoren, zoals Kovac's reagens. Label alle buizen en platen op de juiste manier, zodat ze niet mengen, wat tot foutieve resultaten leidt.

2. Zaai je bacteriën in. Dit bepaalt de vorm en kleur van uw bacterie, zoals grampositief (paars), gramnegatief (rood of roze), kokosnoten (rond), spirocheten (spiraal) of staafjes. Om je bacterie te zaaien, heb je een schoon mes, water, gekristalliseerd violet, jodium, bleekmiddel, safranin, absorberend papier, een lichtmicroscoop en wat papieren handdoeken nodig. Nadat je de lus hebt gevlamd, gebruik je deze om een ​​druppel water op het blad te plaatsen. Flamb de lus opnieuw en plaats dan een kleine hoeveelheid van je onbekende bacteriën in de druppel water. Leid het blad een paar keer over de vlam om het te drogen en bevestig de bacteriën volledig aan het mes. Bedek het met gekristalliseerd violet, laat het een minuut staan ​​en was het dan voorzichtig. Bedek het mes vervolgens met jodium. Laat het 30 seconden staan ​​en was dan. Plaats een stuk absorberend papier over het blad om overtollig water te verwijderen. Giet vervolgens het bleekmiddel op het blad. Na vijf seconden was je om het bleekmiddel te verwijderen. Bedek tot slot het mes met safranin. Was na 40 seconden het mes en droog het voorzichtig met een papieren handdoek. Plaats een druppel olie op de plek van de bacteriën op de glijbaan en kijk onder de microscoop. Let op de vorm en kleur van de zichtbare bacteriën.

   
   

3. Test de oxidase in uw bacteriën. Hiervoor heeft u een papieren filter, een oxidase-reagens, E. coli, Pseudomonas en zijn onbekende bacteriën nodig. In deze test zijn E. coli en Pseudomonas de controles. Uw bacterie moet minder dan 24 uur oud zijn voor deze test. Flamb het handvat en plaats een kleine hoeveelheid van elke bacterie op een stuk papieren filter. Gebruik een druppelaar om één druppel van het reagens-oxidase in elke bacterie te plaatsen. Na 10 seconden noteert u de kleur van elke bacterie. E. coli zal een positief resultaat geven en Pseudomonas zal een negatief resultaat geven. De bacteriën die positief zijn voor het cytochrome oxidase-enzym worden paars en de negatieve bacteriën veranderen niet van kleur.

4. Test voor waterstofsulfide (SIM). Klik op de hendel en gebruik deze om wat bacteriën van de plaat op te nemen. Inoculeer de SIM-buis met uw bacteriën en bedek deze. Laat deze buis in de oven gedurende 18 tot 24 uur bij 37 ° C. Geef aan of uw bacterie mobiel is (heeft flagellum). Als er sprake is van groei en bewolking ver van waar u de bacteriën hebt geïnoculeerd, is deze mobiel. Plaats vervolgens twee druppels Kovac-reagens in de buis. Als de kleur rood of roze is, is de bacterie positief voor deze test en bevat tryptofaan, waardoor het een indool-producent is. Als de buis zwart wordt, produceren de bacteriën waterstofsulfide.

   
   

5. Voer een Simmon-citraattest uit. Inoculeer de bacteriën in twee reageerbuisjes met Simmon's agar. Laat ze in de oven staan ​​gedurende 18 tot 24 uur bij 37 ° C. De agar is aanvankelijk groen, maar als je bacteriën citraat gebruiken als koolstofbron, verandert de kleur van groen naar blauw. Blauw is het positieve resultaat. Als de buizen groen blijven, zijn hun bacteriën negatief voor het gebruik van citraat als een enkele koolstofbron.

6. Voer een methylrood-test uit (MRVP). Voor deze test heb je twee tubes nodig die een oplossing van pepton, buffers en dextrose (of glucose) bevatten. Inoculeer elke buis met de onbekende bacteriën en keer terug naar de kachel gedurende 18 tot 24 uur bij 37 ° C. Voeg drie druppels methylrood toe aan een tube als je klaar bent. Dit wordt je MR-buis. Als de buis verandert van geel in rood, is de bacterie positief en wordt tijdens de fermentatie een gemengde zuurroute gebruikt (melkzuur, azijnzuur en mierenzuur worden geproduceerd). Voeg in de tweede buis drie druppels van het VP-reagens toe. Als de buis rood wordt, is de bacterie positief voor de vorming van diacetyl, een fermentatieproduct. Als de buis bruin wordt, is je bacterie negatief.

7. Vind uw bacteriën door de positieve en negatieve resultaten in het stroomdiagram te noteren.