Inhoud
Koude alcohol wordt gebruikt om DNA te scheiden van op water gebaseerde oplossingen, waardoor het kan worden gezuiverd voor daaropvolgende genetische testen. Het toevoegen van alcohol aan een oplossing die DNA bevat, is een eenvoudige manier om het zuiver te maken bij lagere temperaturen en de enzymen die het afbreken te vertragen, wat betere extractieresultaten oplevert.
Brekende celmuren
De extractieprocedures voor het verkrijgen van zuiver DNA moeten alle moleculaire en chemische componenten van het weefsel waarvan het DNA wordt geëxtraheerd, verwijderen. De eerste stappen omvatten de vernietiging van celwanden. Dit kan worden gedaan met verschillende chemische middelen die bijtend zijn voor celmembranen, maar DNA niet beschadigen. De cellen kunnen ook worden gesoniceerd, gehomogeniseerd of gemalen om de membranen te vernietigen.
Lipiden verwijderen
Zodra de celwanden zijn vernietigd, wordt een reinigingsmiddel toegevoegd om de vetten en oliën die de celmembranen vormen, kwijt te raken. Detergentia veroorzaken het oplossen van oliën en vetten in oplossing.
Eiwitten verwijderen
Eiwitten en enzymen kunnen worden verteerd door een protease aan de oplossing toe te voegen. Proteasen splitsen eiwitten af in kleine peptiden en aminozuren.
DNA neerslaan
De toevoeging van ijskoude alcohol aan een oplossing zal precipiteren en het DNA aggregeren. Het genetische materiaal kan worden verzameld door het monster te centrifugeren en de vloeistoflaag te decanteren. Het moet als een klein sediment op de bodem van de centrifugebuis bestaan.
Zuiverend DNA
Het DNA kan worden gewassen door opnieuw te suspenderen in een koude alcoholoplossing en enkele keren opnieuw worden gecentrifugeerd om een zeer zuiver monster te verkrijgen. Typerende gebruikte alcoholen omvatten ethanol en isopropanol. Dit proces laat een zeer zuiver monster achter in rigoureuze tests.
